HIV-nakkuse õigeaegne diagnoosimine muutub äärmiselt oluliseks meetmeks, kuna varasem ravi võib suuresti määrata haiguse edasise arengu ja pikendada patsiendi eluiga. AT viimased aastad Selle kohutava haiguse avastamise valdkonnas on tehtud märkimisväärseid edusamme: vanad testimissüsteemid asendatakse arenenumatega, uurimismeetodid muutuvad kättesaadavamaks ja nende täpsus suureneb oluliselt.

Selles artiklis räägime kaasaegsetest HIV-nakkuse diagnoosimise meetoditest, mida on kasulik teada selle probleemi õigeaegseks raviks ja patsiendi normaalse elukvaliteedi säilitamiseks.

HIV-i diagnoosimise meetodid

Venemaal viiakse HIV-nakkuse diagnoosimiseks läbi standardprotseduur, mis hõlmab kahte taset:

• ELISA testisüsteem (sõelanalüüs);
• immuunblotanalüüs (IB).

Kasutada võib ka muid diagnostilisi meetodeid:

• ekspresstestid.

ELISA testisüsteemid

Diagnoosimise esimeses etapis kasutatakse HIV-nakkuse tuvastamiseks skriiningtesti (ELISA), mis põhineb laborites loodud HIV-valkudel, mis püüavad kinni infektsioonile vastuseks organismis toodetud spetsiifilised antikehad. Pärast nende interaktsiooni katsesüsteemi reagentidega (ensüümidega) muutub indikaatori värvus. Lisaks töödeldakse neid värvimuutusi spetsiaalsel seadmel, mis määrab tehtud analüüsi tulemuse.

Sellised ELISA testid näitavad tulemusi mõne nädala jooksul pärast HIV-nakkuse sissetoomist. See analüüs ei määra viiruse olemasolu, vaid tuvastab selle vastaste antikehade tekke. Mõnikord algab HIV-vastaste antikehade tootmine inimkehas 2 nädalat pärast nakatumist, kuid enamikul inimestel toodetakse neid kauem kui hilisemad kuupäevad 3-6 nädala pärast.

Erineva tundlikkusega ELISA teste on neli põlvkonda. Viimastel aastatel on sagedamini kasutusele võetud III ja IV põlvkonna testimissüsteemid, mis põhinevad sünteetilistel peptiididel või rekombinantsetel valkudel ning on suurema spetsiifilisuse ja täpsusega. Neid saab kasutada HIV-nakkuse diagnoosimiseks, HIV levimuse jälgimiseks ja ohutuse tagamiseks annetatud vere testimisel. III ja IV põlvkonna ELISA testisüsteemide täpsus on 93-99% (riikides toodetakse tundlikumaid teste Lääne-Euroopa – 99%).

ELISA testi tegemiseks võetakse patsiendi veenist 5 ml verd. vahel viimane trikk toit ja analüüs peaksid võtma vähemalt 8 tundi (reeglina tehakse seda hommikul tühja kõhuga). Sellist testi soovitatakse teha mitte varem kui 3 nädalat pärast väidetavat nakatumist (näiteks pärast kaitsmata vahekorda uue seksuaalpartneriga).

ELISA testi tulemused saadakse 2-10 päeva pärast:

• negatiivne tulemus: näitab HIV-nakkuse puudumist ja ei nõua eriarsti suunamist;
• valenegatiivne tulemus: võib täheldada varajased kuupäevad infektsioon (kuni 3 nädalat), AIDSi hilises staadiumis koos raske immuunsupressiooni ja ebaõige vere ettevalmistamisega;
• vale positiivne tulemus: võib täheldada mõne haiguse ja vale vere ettevalmistamise korral;
• positiivne tulemus: viitab HIV-infektsiooniga nakatumisele, nõuab IB-d ja patsiendi suunamist AIDS-i keskuse eriarsti vastuvõtule.

Miks võib ELISA test anda valepositiivseid tulemusi?

ELISA-testi HIV-testi valepositiivseid tulemusi võib täheldada vale veretöötluse või selliste seisundite ja haigustega patsientidel:

• hulgimüeloom;
• nakkushaigused, provotseeritud Epstein-Barri viiruse poolt;
• olek pärast ;
• autoimmuunhaigused;
• raseduse taustal;
• seisund pärast vaktsineerimist.

Ülalkirjeldatud põhjustel võib veres esineda mittespetsiifilisi ristreageerivaid antikehi, mille teket HIV-nakkus ei kutsunud esile.

Viimastel aastatel on valepositiivsete tulemuste sagedus oluliselt vähenenud tänu III ja IV põlvkonna testsüsteemide kasutamisele, mis sisaldavad tundlikumaid peptiid- ja rekombinantseid valke (need sünteesitakse in vitro geenitehnoloogia abil). Pärast selliste ELISA testide kasutamist on valepositiivsete tulemuste sagedus oluliselt vähenenud ja on umbes 0,02-0,5%.

Valepositiivne tulemus ei tähenda, et inimene on HIV-i nakatunud. Sellistel juhtudel soovitab WHO teist ELISA testi (kohustuslik IV põlvkond).

Patsiendi veri saadetakse referent- või arbitraažilaborisse, millel on märge "korda" ja seda testitakse IV põlvkonna ELISA testisüsteemiga. Kui uue analüüsi tulemus on negatiivne, tunnistatakse esimene tulemus ekslikuks (valepositiivne) ja IB-d ei tehta. Kui teise testi tulemus on positiivne või kaheldav, peab patsient HIV-nakkuse kinnitamiseks või ümberlükkamiseks läbima IB 4-6 nädala pärast.

immuunbloteerimine

HIV-nakkuse lõplikku diagnoosi saab teha alles pärast positiivse immuunblotanalüüsi (IB) tulemuse saamist. Selle rakendamiseks kasutatakse nitrotselluloosi riba, millele kantakse viirusvalgud.

IB vereproovid võetakse veenist. Seejärel töödeldakse seda spetsiaalselt ja selle seerumis sisalduvad valgud eraldatakse spetsiaalses geelis vastavalt nende laengule ja molekulmassile (manipulatsioon toimub spetsiaalsel seadmel elektrivälja mõjul). Vereseerumi geelile kantakse nitrotselluloosi riba ja spetsiaalses kambris tehakse blotimine (“bloteerimine”). Riba töödeldakse ja kui kasutatud materjalid sisaldavad HIV-vastaseid antikehi, seostuvad need IB antigeensete ribadega ja kuvatakse joontena.

IB loetakse positiivseks, kui:

• Ameerika CDC kriteeriumide järgi - ribal on kaks või kolm rida gp41, p24, gp120 / gp160;
• Ameerika FDA kriteeriumide kohaselt - ribal on kaks rida p24, p31 ja rida gp41 või gp120 / gp160.

99,9% juhtudest viitab positiivne IB tulemus HIV-nakkusele.

Ridade puudumisel on IB negatiivne.

Liinide tuvastamisel gp160, gp120 ja gp41-ga on IB kaheldav. Sellist tulemust saab tuvastada, kui:

• onkoloogilised haigused;
• Rasedus;
• sagedased vereülekanded.

Sellistel juhtudel on soovitatav läbi viia teine ​​uuring, kasutades teise ettevõtte komplekti. Kui pärast täiendavat IB-d jääb tulemus kahtlane, siis on vajalik järelkontroll kuus kuud (IB tehakse iga 3 kuu järel).

polümeraasi ahelreaktsioon

PCR-testiga saab tuvastada viiruse RNA-d. Selle tundlikkus on üsna kõrge ja võimaldab tuvastada HIV-nakkuse juba 10 päeva pärast nakatumist. Mõnel juhul võib PCR anda valepositiivseid tulemusi, kuna selle kõrge tundlikkus võib reageerida ka teiste infektsioonide antikehadele.

See diagnostikameetod on kallis, nõuab spetsiaalset varustust ja kõrgelt kvalifitseeritud spetsialiste. Need põhjused ei võimalda seda populatsiooni massilise testimise ajal läbi viia.

PCR-i kasutatakse järgmistel juhtudel:

• HIV avastamiseks vastsündinutel, kes on sündinud HIV-nakkusega emadele;
• HIV tuvastamiseks "aknaperioodil" või kahtlase IB korral;
• kontrollida HIV kontsentratsiooni veres;
• doonorivere uurimiseks.

Ainult PCR-testiga HIV diagnoosi ei panda, vaid see viiakse läbi täiendava diagnostilise meetodina vaidluste lahendamiseks.

Ekspressmeetodid

HIV-diagnostika üheks uuenduseks on saanud kiirtestid, mille tulemusi saab hinnata 10-15 minutiga. Kõige tõhusamad ja täpsemad tulemused saadakse kapillaaride voolu põhimõttel põhinevate immunokromatograafiliste testidega. Need on spetsiaalsed ribad, millele kantakse verd või muid uuritavaid vedelikke (sülg, uriin). HIV-vastaste antikehade olemasolul ilmub 10-15 minuti pärast testile värviline kontrollriba - positiivne tulemus. Kui tulemus on negatiivne, kuvatakse ainult kontrolljoon.

Nagu ELISA testide puhul, tuleb kiirtesti tulemusi kinnitada IB analüüsiga. Alles pärast seda saab määrata HIV-nakkuse diagnoosi.

Koduseks testimiseks on olemas kiirkomplektid. OraSure Technologies1 (USA) test on FDA poolt heaks kiidetud, saadaval ilma retseptita ja seda saab kasutada HIV tuvastamiseks. Pärast testi, positiivse tulemuse korral, soovitatakse patsiendil diagnoosi kinnitamiseks läbida uuring spetsialiseeritud keskuses.

Muud testid koduseks kasutamiseks ei ole FDA veel heaks kiitnud ja nende tulemus võib olla väga küsitav.

Hoolimata asjaolust, et kiirtestid on IV põlvkonna ELISA testidest madalama täpsusega, kasutatakse neid laialdaselt elanikkonna täiendavaks testimiseks.

HIV-nakkuse testi saate teha igas polikliinikus, Regionaalhaiglas või AIDSi spetsialiseeritud keskustes. Venemaa territooriumil hoitakse neid täiesti konfidentsiaalselt või anonüümselt. Iga patsient võib enne või pärast analüüsi oodata meditsiinilist või psühholoogilist nõu. HIV-testide eest peate maksma ainult kaubanduses raviasutused ning avalikes kliinikutes ja haiglates tehakse neid tasuta.

Lisateavet selle kohta, kuidas võite saada HIV-nakkuse ja millised müüdid levivad nakatumisvõimaluste kohta, lugege

Kriitiline HIV-nakkuse diagnoosimisel laboratoorne diagnostika, mis seisneb HIV-vastaste antikehade tuvastamises veres ELISA abil, millele järgneb positiivsete tulemuste kinnitamine IB-ga. See HIV-nakkuse diagnoosimise meetod võimaldab tuvastada HIV-nakatunud isikuid 99% efektiivsusega.

Näidustused erinevate kasutamiseks laboriuuringud ja tulemuste tõlgendamise tunnused

Praegu kasutatakse HIV-nakkuse diagnoosimise sõeluuringu etapis ELISA meetodil põhinevaid kolmanda ja neljanda põlvkonna reaktiivide komplekte. Neljanda põlvkonna testide eripäraks on võime tuvastada samaaegselt AH-d (p24) ja kogu AT-d, samas kui kolmanda põlvkonna testid võimaldavad määrata ainult AT-d. Võimaluse korral tuleks eelistada neljanda põlvkonna teste nende kõrgema diagnostilise tundlikkuse ja võime tõttu tuvastada isikutel seroloogilise akna ajal nakatumist.

Negatiivne tulemus HIV-i antikehade tuvastamisel ELISA abil ei viita alati nakkuse puudumisele. tõsine probleem esindavad neid juhtumeid, kus test tehti seroloogilise akna ajal, st. esimestel nädalatel pärast nakatumist, kui HIV-vastaseid antikehi pole veel piisavas koguses välja kujunenud. Mõnel inimesel võib seroloogiline aken kesta mitu kuud, nii et kui on tõendeid HIV-nakkusega inimestega kokkupuute kohta, tehakse kordustestid tavaliselt 2–3 kuu pärast. HIV-vastaste antikehade tuvastamise valenegatiivsed tulemused ELISA abil on võimalik saada haiguse lõppstaadiumis, mida iseloomustab tõsine kahjustus. immuunsussüsteem antikehade moodustumise protsessi sügava rikkumisega.

Antikehade tuvastamise positiivne tulemus ELISA abil näitab HIV-nakkuse nakatumise tõenäosust, kuid mõnikord võib see tulemus olla valepositiivne, näiteks kui inimesel on kasvajad, allergilised haigused, raseduse ajal, kui autoimmuunhaigused, olulised muutused biokeemiliste vereanalüüside näitajates, mitmed kroonilised haigused. Sellistel juhtudel on vaja täiendavaid uuringuid ekspertlaboris.

Kui HIV-vastaste antikehade tuvastamisel ELISA abil saadakse positiivne tulemus, on selle kinnitamine vajalik. Kinnitamise esimeses etapis korratakse analüüsi samas katsesüsteemis kahes kaevus – see välistab tehnilised vead. Kui tulemus kinnitatakse, korratakse antikehade määramist ELISA abil patsiendi seerumis, kasutades kahte võrdlusreaktiivide komplekti. Kui vähemalt ühes neist uuringutest saadakse positiivne tulemus, võetakse ette kinnituse kolmas etapp: uuring IB-meetodil, mis võimaldab tuvastada antikehasid üksikute HIV antigeeni valkude vastu.

IB-meetodil saadud tulemusi tõlgendatakse positiivsetena, kahtlastena ja negatiivsetena. Tulemused loetakse negatiivseks (negatiivseks), kui testitavas seerumis ei leita ühegi HIV antigeeni vastaseid antikehi või esineb nõrk reaktsioon p17 valguga. Kõige mõjuvam põhjus positiivne reaktsioon on HIV ümbrisvalkude (glükoproteiinid gp41, gp120, gp160) vastaste antikehade tuvastamine. Tulemus loetakse positiivseks, kui tuvastatakse antikehad mis tahes kahe HIV glükoproteiini vastu. Kui reaktsioon toimub ainult ühe ümbrisvalguga, kombinatsioonis reaktsiooniga teiste valkudega või ilma selleta, peetakse tulemust kaheldavaks, sel juhul on soovitatav läbi viia testid p24 antigeeni või HIV DNA / RNA tuvastamiseks. Kui tuvastatakse p24 hüpertensioon või HIV DNA/RNA, tehakse kordustest IB-ga 2 nädalat pärast esimest määramatut tulemust ja seejärel iga 2 nädala järel, kuni kinnitava testi tulemuseni saadakse positiivne tulemus. Kui 6 kuud pärast esimest läbivaatust saadakse uuesti ebamäärased tulemused ning patsiendil puuduvad nakkuse riskifaktorid ja kliinilised sümptomid HIV-nakkusega, loetakse tulemust valepositiivseks.

Sageli ilmuvad 1-3-6 kuud pärast kahtlase tulemuse saamist vereseerumis üksteise järel antikehad kõigi HIV-antigeenide vastu. Sel juhul on tõendiks kahtlane tulemus esialgne etapp HIV-nakkused. Mõnel juhul täheldatakse IB kahtlaseid tulemusi nakatumata isikutel, kelle kehas on antikehad, mis on sarnased tõeliste HIV-antikehadega.

Üks HIV-nakkuse kaudseid tunnuseid on CD4+ T-abistajarakkude selektiivne vähenemine, mis tuleneb sellest, et HIV-l on tropism CD4 raku retseptori suhtes. Kuid need muutused võivad HIV-nakkuse teatud staadiumides puududa, erineda patsienditi ja esineda muude haiguste korral. Niisiis, täiskasvanud patsientidel, kes on haiguse varjatud staadiumis, ületab CD4 + lümfotsüütide arv tavaliselt 0,5. 109/l, mis vastab tervete inimeste väärtustele.

Sõeluuring - tuvastamata haigestumuse sageduse tuvastamine kiirtestide abil. Testimise ja sõeluuringu massipraktikas kasutatakse kõige sagedamini meetodeid ensüümi immuunanalüüs mis võib anda nii valepositiivseid kui ka valenegatiivseid tulemusi. Need testid töötati välja annetatud vere uurimiseks ja on seetõttu kõrge tundlikkusega, et isegi tõenäoline viga nende analüüsis annab positiivse tulemuse. Sel juhul tuleb veri hävitada ja doonor ise läbib kontrolltesti. Valenegatiivsed tulemused sõltuvad inkubatsiooniperiood HIV puhul - nakatumine on 1-3 kuud. Sel perioodil on inimene viiruse kandja, mida HIV-antikehade test ei tuvasta.

Kõigil peaks olema võimalus end HIV-antikehade suhtes testida. Testimine võib olla vabatahtlik või kohustuslik. Vabatahtliku anonüümse testimise korral registreeritakse patsient numbri all, kusjuures dokumenti ei kanta ei patsiendi aadressi ega nime. Konfidentsiaalsel testimisel kantakse patsiendi isik tema haiguslugudesse HIV-testiga peaks kaasnema patsiendi nõustamine nii enne kui ka pärast testimist. Patsiendi adekvaatsest informeerimisest saab parim psühhoteraapia.Lõplikult teavitatakse patsiente testi tulemustest alles pärast positiivsete testitulemuste kinnitamist. Seda tehakse selleks, et vältida selliseid traagilisi juhtumeid, nagu juhtus 1998. aastal Riias: abikaasad sooritasid ühelt positiivsetest testitulemustest teada saades enesetapu; HIV-nakkuse fakti surmajärgseid uuringuid ei leitud. HIV-i kohustuslik testimine ja sõeluuring on vastuoluline teema. Alates 1985. aastast on USA kehtestanud sõjaväes kohustusliku testimise. Mõned osariigid nõuavad AIDS-i testimist enne abiellumist ja alates 1997. aastast on New Yorgi osariigis kehtestatud kohustuslik HIV-testimine kõigile vastsündinutele.

Paljud väliseksperdid leiavad, et kohustusliku HIV-testimise praktika ei riku mitte ainult inimõigusi, vaid osutub ebatõhusaks ka epideemia leviku tõkestamiseks ning seetõttu tuleks selle rakendamist piirata.

Meie riigis kehtestati AIDS-i juhtude kohustuslik registreerimine 1985. aastal, alates esimese haigusjuhtumi avastamise hetkest. 1987. aastal teatas üleliiduline raadio epidemioloogide eestvõttel Moskvas anonüümse AIDSi sõeluuringu ruumi avamisest. Paar päeva hiljem alustas see kontor tööd, võttes vastu kuni tuhat inimest kuus. Selle tulemusena 1987.–1992. on tehtud üle 85 miljoni HIV-testi.

Venemaal kasutatakse riigis laialdaselt "epidemioloogilise uurimise meetodit". Epidemioloogiline uurimine on igal nakatumisjuhul nakkusallika väljaselgitamine, võimalusel kogu nakkuse edasikandumise “ahela” taastamine ja samal ajal nakkuse leviku tõkestamiseks võetavad meetmed. vastu võetud 1995. aastal. föderaalseadus"Inimese immuunpuudulikkuse viiruse poolt põhjustatud haiguse leviku tõkestamise kohta Vene Föderatsioonis" tühistati "partnerite" AIDSi kohustusliku testimise nõue. Samuti on ära jäetud HIV-i nakatunute kohustuslik ennetav jälgimine tervishoiuasutustes. Seaduse järgi peavad AIDSi suhtes kohustuslikus korras testima ainult vere, bioloogiliste vedelike, elundite ja kudede doonoreid ning teatud elukutsete esindajaid.

HIV-nakkuse diagnoosi saab määrata laboris, tuvastades viiruse spetsiifilised antikehad. Paljude teistega viirushaigused antikehade olemasolu viitab varasemale infektsioonile. Kuna aga HIV-nakkus areneb krooniline infektsioon, seropositiivsed isikud ei ole mitte ainult aktiivselt nakatunud, vaid ka nakkavad.

Seroloogiline test HIV-vastaste antikehade olemasolu tuvastamiseks sai laialdaselt kättesaadavaks 1985. aastal. Kõige sagedamini kasutatav meetod on ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA), kuid väljatöötamisel on ka teist tüüpi antikehade testid, nagu osakeste aglutinatsioon ja "punkt" ELISA. Teste saab teha kiiresti ja lihtsalt ning see ei nõua keerulisi seadmeid.

Kuigi ülaltoodud testid on väga tundlikud, võivad need anda ka valesid tulemusi ja positiivset tulemust tuleb täiendavalt kinnitada täiendava testiga, nagu Western blot või kaudne immunofluorestsents.

Samuti on võimalik otseselt määrata HIV-antigeene (viirus või viirusvalk) spermas; tööstus toodab vajalikke reaktiivide komplekte. Need analüüsid olid algselt kavandatud katseks anda laboratoorsed näitajad infektsiooni esinemise kohta infektsiooni ja antikehade tootmise vahelisel ajavahemikul, mis kestab tavaliselt 4–16 nädalat. Antigeenianalüüse kasutatakse nüüd laiemalt AIDS-i patsientide viirusevastase ravi tulemuste jälgimiseks.

HIV-nakkuse sõeluuringuprogrammid (st kogu elanikkonna või konkreetsete alampopulatsioonide sõelumine nakkuse või haiguse kindlakstegemiseks) võivad aidata:

• vältida viiruse edasikandumist vere ja veretoodete, sperma, kudede või siirdamiseks mõeldud elundite kaudu;
• saada epidemioloogilist teavet HIV levimuse ja esinemissageduse kohta.

Kui sõeluuringuprogrammi arutatakse, tuleks kõik WHO avalduses (lisa 4) märgitud küsimused selgelt väljendada ja käsitleda. Halvasti kavandatud ja halvasti rakendatud programmid võivad kahjustada rahvatervist ja raisata ressursse. Rahvatervise vajadusi ja inimõigusi teenib kõige paremini mitmete tehnoloogia, logistika ning sotsiaalsete, juriidiliste ja eetiliste küsimuste hoolikas kaalumine, enne kui tehakse otsus sõeluuringuprogrammiga jätkata.

Kohustuslikul HIV-sõeluuringul on AIDSi ennetus- ja tõrjeprogrammides väga piiratud roll.

Doonorite rutiinne sõeluuring aitab vältida HIV-nakkuse levikut vere, sperma või muude rakkude, kudede ja elundite kaudu. Osa sellisest läbivaatusest on isiku teadlik nõusolek ja konsultatsioonid, mida tuleb hoida konfidentsiaalsena.

Seropositiivsete isikute identifitseerimine uuringu abil võimaldab määrata HIV epidemioloogilise tüübi, mis on vajalik erihariduslikke programme või muid ennetusteenuseid vajavate piirkondade ja populatsioonide hindamiseks. Need uuringud tuleks läbi viia meetoditega, mis ei ohusta inimõiguste austamist. Need tuleks läbi viia konsultatsiooni ajal kas teadliku isiku nõusolekul, austades konfidentsiaalsust, või anonüümselt ja vabal viisil (muid isikut tuvastavaid andmeid salvestamata).

Vabatahtlik AIDSi testimine võib olla osa tervishoiust HIV-ga seotud haiguste kahtluse korral ning seda saab integreerida teabe, hariduse, nõustamise ja muude tugiteenustega, et edendada jätkusuutlikku käitumise muutust. Vabatahtliku HIV-testimise puhul on väga olulised teadliku isiku nõusoleku saamine ja võimalus saada nõustamist, säilitades samas konfidentsiaalsuse. Vabatahtlikud HIV-testiteenused peaksid olema AIDSi ennetus- ja tõrjeprogrammide osana laialdaselt kättesaadavad ning juurdepääsu sellistele teenustele tuleks hõlbustada.