Своевременная диагностика ВИЧ-инфекции становится крайне важной мерой, т. к. ранее начало лечения может во многом предопределить дальнейшее развитие заболевания и продлить жизнь больного . В последние годы наблюдается весомый прогресс в области выявления этой страшной болезни: на смену старым тест-системам приходят более совершенные, методы обследования становятся более доступными, и их точность значительно повышается.

В данной статье расскажем о современных методах диагностики ВИЧ-инфекции, знать которые полезно для своевременного лечения данной проблемы и поддержания нормального качества жизни заболевшего.

Методики диагностики ВИЧ

В России для диагностики ВИЧ-инфекции проводится стандартная процедура, включающая в себя два уровня:

• ИФА тест- система (скрининговый анализ);
• иммунный блоттинг (ИБ).

Также для диагностики могут применяться другие методики:

• экспресс-тесты.

ИФА тест-системы

На первом этапе диагностики для выявления ВИЧ-инфекции применяется скрининговый тест (ИФА), который основан на созданных в лабораториях белках ВИЧ, улавливающих вырабатывающиеся в организме в ответ на инфицирование специфические антитела. После их взаимодействия с реагентами (ферментами) тест-системы изменяется окраска индикатора. Далее эти изменения цвета обрабатываются на специальной аппаратуре, которая и определяет результат выполненного анализа.

Такие ИФА-тесты способны показывать результат уже через несколько недель после внедрения ВИЧ-инфекции. Этот анализ определяет не наличие вируса, а выявляет выработку антител к нему. Иногда, в организме человека выработка антител к ВИЧ начинается через 2 недели поле заражения, но у большинства людей они вырабатываются на более поздних сроках, спустя 3-6 недель.

Существует четыре поколения ИФА-тестов с различной чувствительностью. В последние годы чаще применяются тест-системы III и IV поколения, которые созданы на основе синтетических пептидов или рекомбинантных белков и обладают большей специфичностью и точностью. Они могут использоваться для диагностики ВИЧ-инфекции, мониторинга распространенности ВИЧ и обеспечения безопасности при проверке донорской крови. Точность ИФА-тест-систем III и IV поколения составляет 93-99% (более чувствительны тесты, которые выпускаются в странах западной Европы – 99%).

Для выполнения ИФА-теста проводится забор 5 мл крови из вены пациента. Между последним приемом пищи и анализом должно пройти не менее 8 часов (как правило, он выполняется утром натощак). Такой тест рекомендуется сдавать не ранее, чем через 3 недели после предполагаемого заражения (например, после незащищенного полового акта с новым половым партнером).

Результаты ИФА-теста получаются через 2-10 дней:

• отрицательный результат: указывает на отсутствие инфицирования ВИЧ и не требует обращения к специалисту;
• ложноотрицательный результат: может наблюдаться на ранних сроках инфицирования (до 3 недель), при поздних стадиях СПИДа при выраженном подавлении иммунитета и при неправильно проведенной подготовке крови;
• ложноположительный результат: может наблюдаться при некоторых заболеваниях и при неправильно проведенной подготовке крови;
• положительный результат: указывает на заражение ВИЧ инфекцией, требует проведения ИБ и обращения пациента к специалисту в центр СПИДа.

Почему ИФА-тест может давать ложноположительные результаты?

Ложноположительные результаты ИФА-теста на ВИЧ могут наблюдаться при неправильной обработке крови или у больных с такими состояниями и заболеваниями:

• множественная миелома;
• инфекционные заболевания, спровоцированные вирусом Эпштейна-Барр;
• состояние после ;
• аутоиммунные заболевания;
• на фоне беременности;
• состояние после вакцинации.

При вышеописанных причинах в крови могут присутствовать неспецифические перекрестно реагирующие антитела, выработка которых была спровоцирована не ВИЧ-инфекцией.

В последние годы частота ложноположительных результатов существенно снизилась благодаря применению тест-систем III и IV поколения, которые содержат более чувствительные пептидные и рекомбинантные белки (они синтезируются при помощи генной инженерии in vitro). После начала применения таких ИФА-тестов частота ложноположительных результатов значительно снизилась и составляет около 0,02-0,5%.

Выявление ложноположительного результата не означает, что человек инфицирован ВИЧ. В таких случаях ВОЗ рекомендует провести еще один ИФА-тест (обязательно IV поколения).

Кровь пациента отправляется в референс или арбитражную лабораторию с пометкой «повторить» и исследуется на ИФА тест-системе IV поколения. Если результат нового анализа отрицательный, то первый результат признается ошибочным (ложноположительным) и ИБ не проводится. При положительном или сомнительном результате во время второго теста больному обязательно назначается проведение ИБ через 4-6 недель для подтверждения или опровержения ВИЧ-инфицирования.

Иммунный блоттинг

Окончательный диагноз инфицирования ВИЧ может устанавливаться только после получения положительного результата иммунного блоттинга (ИБ). Для его проведения применяется нитроцеллюлозная полоска, на которую нанесены вирусные белки.

Забор крови для ИБ выполняется из вены. Далее она подвергается специальной обработке и содержащиеся в ее сыворотке белки разделяют в специальном геле по их заряду и молекулярной массе (манипуляция проводится на специальной аппаратуре под воздействием электрического поля). На гель из сыворотки крови накладывают нитроцеллюлозную полоску и проводят блоттинг («промакивание») в специальной камере. Полоска обрабатывается и если в используемых материалах есть антитела к ВИЧ, то они связываются с антигенными полосами на ИБ и проявляются в виде линий.

ИБ считается положительным если:

• по критериям American CDC – на полоске есть две или три линии gp41, p24, gp120/gp160;
• по критериям American FDA – на полоске есть две линии р24, р31 и линия gр41 или gр120/gр160.

В 99,9% случаев положительный результат ИБ указывает на ВИЧ-инфицирование.

При отсутствии линий – ИБ является отрицательным.

При выявлении линий с gр160, gр120 и gр41- ИБ является сомнительным. Такой результат может выявляться при:

• онкологических заболеваниях;
• беременности;
• частых трансфузиях крови.

В таких случаях рекомендуется выполнение повторного исследования при помощи набора другой фирмы. Если же после дополнительного ИБ результат остается сомнительным, то необходимо наблюдение в течение полугода (через каждые 3 месяца проводятся ИБ).

Полимеразная цепная реакция

Тест на ПЦР может определять РНК вируса. Его чувствительность достаточно высока и он позволяет выявлять ВИЧ-инфицирование уже через 10 дней после заражения. В некоторых случаях ПЦР может давать ложноположительные результаты, т. к. его высокая чувствительность может реагировать и на антитела к другим инфекциям.

Данная методика диагностики является дорогостоящей, требует специального оборудования и высокой квалификации специалистов. Эти причины не дают возможности проводить ее при массовом тестировании населения.

ПЦР применяется в таких случаях:

• для выявления ВИЧ у новорожденных, которые родились от ВИЧ-инфицированных матерей;
• для выявления ВИЧ в «периоде окна» или при сомнительном ИБ;
• для контроля концентрации ВИЧ в крови;
• для исследования донорской крови.

Только по тесту ПЦР диагноз ВИЧ не ставится, а проводится в качестве дополнительного метода диагностики для разрешения спорных ситуаций.

Экспресс-методы

Одной из инноваций в диагностике ВИЧ стали экспресс-тесты, результаты которых могут оцениваться уже через 10-15 минут. Наиболее эффективные и точные результаты получаются при помощи иммунохроматографических тестах, основанных на принципе капиллярного потока. Они представляют собой специальные полоски, на которые наносится кровь или другие исследуемые жидкости (слюна, моча). При наличии антител к ВИЧ спустя 10-15 минут на тесте появляются цветная и контрольная полоска – положительный результат. При отрицательном результате – появляется только контрольная полоска.

Как и после тестов ИФА, результаты экспресс-тестов должны подтверждаться анализом ИБ. Только после этого может ставиться диагноз о ВИЧ-инфицировании.

Существуют экспресс-наборы для домашнего тестирования. Тест OraSure Technologies1 (США) одобрен FDA, продается без рецепта и может применяться для выявления ВИЧ. После проведения теста, в случае положительного результата, больному рекомендуется пройти обследование в специализированном центре для подтверждения диагноза.

Остальные тесты для домашнего использования еще не были одобрены FDA и их результат может быть очень сомнительным.

Несмотря на то, что экспресс-тесты по своей точности уступают ИФА-тестам IV поколения, они широко применяются для дополнительного тестирования населения.

Сдать анализы на выявление ВИЧ-инфекции можно в любой поликлинике, ЦРБ или в специализированных СПИД-центрах. На территории России они проводятся абсолютно конфиденциально, или анонимно. Каждый пациент может рассчитывать на получение медицинской или психологической консультации до или после проведения анализа. Платить за тесты на ВИЧ придется только в коммерческих лечебных учреждениях, а в государственных поликлиниках и больницах они выполняются бесплатно.

О том, какими путями можно заразиться ВИЧ-инфекцией и какие мифы существуют о возможностях заразиться, читайте в

Решающее значение в постановке диагноза ВИЧ-инфекции играет лабораторная диагностика, которая заключается в обнаружении АТ к ВИЧ в крови методом ИФА с последующим подтверждением положительных результатов методом ИБ. Такой метод диагностики ВИЧ-инфекции позволяет выявлять ВИЧ-инфицированных лиц с эффективностью 99%.

Показания к применению различных лабораторных исследований и особенности интерпретации результатов

В настоящее время для скринингового этапа диагностики ВИЧ-инфекции используются наборы реагентов третьего и четвертого поколений, основанные на методе ИФА. Отличительной особенностью тестов четвертого поколения является возможность одновременного выявления АГ (p24) и суммарных АТ, в то время как тесты третьего поколения позволяют определять только АТ. По возможности, предпочтение должно отдаваться тестам четвертого поколения, ввиду их более высокой диагностической чувствительности и возможности выявления инфекции у лиц в период серологического окна.

Отрицательный результат при выявлении АТ к ВИЧ методом ИФА не всегда свидетельствует об отсутствии заражения. Серьезную проблему представляют те случаи, когда тест проведен в период серологического окна, т.е. в первые недели после заражения, когда еще не выработались в достаточном количестве АТ к ВИЧ. У отдельных лиц период серологического окна может затянуться на несколько месяцев, поэтому при наличии данных, свидетельствующих о контакте с инфицированными ВИЧ, обычно проводят повторные исследования через 2–3 месяца. Ложноотрицательные результаты выявления АТ к ВИЧ при использовании ИФА могут быть получены в терминальной стадии болезни, характеризующейся тяжелым поражением иммунной системы с глубоким нарушением процесса образования АТ.

Положительный результат выявления АТ методом ИФА указывает на вероятность заражения ВИЧ-инфекцией, но иногда этот результат может быть ложноположительным, например, при наличии у человека опухолей, аллергических заболеваний, во время беременности, при аутоиммунных заболеваниях, существенных изменениях показателей биохимического исследования крови, ряде хронических заболеваний. В таких случаях требуются дополнительные исследования в экспертной лаборатории.

В случае получения положительного результата выявления АТ к ВИЧ методом ИФА требуется его подтверждение. На первом этапе подтверждения анализ повторяют в той же тест-системе в двух лунках - это позволяет исключить технические ошибки. Если результат подтвердился, определение АТ методом ИФА в сыворотке пациента повторяют, используя два референтных набора реагентов. Если хотя бы в одном из таких исследований получен положительный результат, предпринимают третью стадию подтверждения: исследование методом ИБ, который позволяет выявить АТ к отдельным белкам-антигенам ВИЧ.

Результаты, полученные методом ИБ, интерпретируются как положительные, сомнительные и отрицательные. Отрицательными (негативными) считают результаты, если в исследуемой сыворотке не обнаружены АТ ни к одному из АГ ВИЧ или имеется слабая реакция с белком р17. Наиболее веским основанием для положительной реакции является обнаружение АТ к белкам оболочки ВИЧ (гликопротеидам gp41, gp120, gp160). Результат считается положительным в случае обнаружения АТ к каким-либо двум гликопротеидам ВИЧ. При наличии реакции только с одним из белков оболочки, в сочетании с реакцией с другими белками или без нее, результат считается сомнительным, в этом случае рекомендуется провести исследования для обнаружения АГ р24 или ДНК/РНК ВИЧ. Если выявлен АГ р24 или ДНК/РНК ВИЧ, повторное обследование с использованием ИБ проводится через 2 недели после получения первого неопределенного результата и в дальнейшем через каждые 2 недели до получения положительного результата в подтверждающем тесте. Если через 6 месяцев после первого обследования вновь будут получены неопределенные результаты, а у пациента не будут выявлены факторы риска заражения и клинические симптомы ВИЧ-инфекции, результат расценивается как ложноположительный.

Нередко по прошествии 1–3–6 месяцев с момента получения сомнительного результата в сыворотке крови появляются одно за другим АТ ко всем АГ ВИЧ. В этом случае сомнительный результат – свидетельство начальной стадии ВИЧ-инфекции. В ряде случаев сомнительные результаты ИБ наблюдаются у неинфицированных лиц, в организме которых есть АТ, схожие с истинными АТ к ВИЧ.

Одним из косвенных признаков ВИЧ-инфекции является избирательное уменьшение CD4+ Т-клеток хелперов в связи с тем, что ВИЧ обладает тропностью к клеточному рецептору CD4. Однако эти изменения могут отсутствовать на определенных стадиях ВИЧ-инфекции, иметь индивидуальные колебания у разных пациентов, а также встречаться при других заболеваниях. Так, у взрослых пациентов, находящихся в латентной стадии заболевания, количество CD4+ лимфоцитов обычно превышает 0,5 . 109/л, что соответствует значениям у здоровых людей.

Скрининг – выявление частоты нераспознанной заболеваемости с помощью быстродействующих тестов. В массовой практике тестирования и скрининга чаще всего используют методы иммуноферментного анализа, которые могут давать как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты. Эти тесты были разработаны с целью исследования донорской крови и поэтому имеют высокую чувствительность, что даже вероятная ошибка при их исследовании дает положительный результат. В этом случае кровь обязательно подлежит уничтожению, а самому донору проводится контрольное тестирование. Ложноотрицательные результаты зависят от того, что инкубационный период для ВИЧ – инфекции составляет 1-3 месяца. В течение этого периода человек является вирусоносителем, чего тест на антитела к ВИЧ не выявляет.

Возможность пройти тест на наличие антител к ВИЧ должна предоставляться каждому. Тестирование может быть добровольным и обязательным. При добровольном анонимном тестировании пациент регистрируется под номером, при этом в документ не заносятся ни адрес, ни фамилия пациента. При конфиденциальном тестировании сведения о личности пациента отражаются в его медицинских документах.Тестирование на ВИЧ должно сопровождаться консультированием пациента как до, так и после проведения тестирования. Адекватное информирование пациента становится лучшей психотерапией.Пациенты окончательно информируются о результатах тестирования только после подтверждения положительных результатов тестирования. Это делается для того, чтобы избежать трагических случаев, подобных тому, произошел в Риге в 1998 г.: супруги, узнав о положительных результатах тестирования у одного из них, покончили жизнь самоубийством; посмертные исследования факта заражения ВИЧ не обнаружились. Проблема обязательного тестирования и скрининга на ВИЧ вызывает бурные споры. В США с 1985 г. Введено обязательное тестирование в армии. В некоторых штатах проверка на СПИД обязательна перед вступлением в брак, а с 1997 г. К обязательной проверке на ВИЧ всех новорожденных приступили в штате Нью-Йорк.

Многие зарубежные специалисты считают, что практика обязательного тестирования на ВИ не только нарушает права человека, но также оказывается малоэффективной как заслон на пути распространения эпидемии, а поэтому её исполнение должно быть ограничено.

В нашей стране обязательная регистрация заболеваний СПИДом была введена в 1985 г., с момента выявления первого случая заболевания. В 1987 г. По инициативе врачей-эпидемиологов по Всесоюзному радио было сообщение об открытии в Москве кабинета анонимного обследования на СПИД. Через несколько дней этот кабинет заработал, принимая до тысячи человек в месяц. В итоге с 1987 по 1992 гг. было проведено свыше 85 млн. тестов на ВИЧ.

В России стране широко применяется «метод эпидрасследования». Эпидрасследование – это выявление источника заражения в каждом случае инфекции, по возможности, восстановление всей «цепочки» передачи инфекции и одновременно предпринимаемые меры по профилактике распространения инфекции. В принятом в 1995 г. Федеральном законе «О предупреждении распространения в РФ заболевания, вызываемого вирусом иммунодефицита человека» требование обязательного тестирования на СПИД «партнеров» было отменено. Отменено также и обязательное профилактическое наблюдение ВИЧ – инфицированных в учреждениях здравоохранения. Согласно закону, обязательному тестированию на СПИД подлежат только доноры крови, биологических жидкостей, органов и тканей, а также представители отдельных профессий.

Диагноз инфекции ВИЧ может быть установлен в лаборатории посредством выявления специфических антител к вирусу. При многих других вирусных заболеваниях наличие антител свидетельствует о перенесенной в прошлом инфекции. Однако, так как при заражении ВИЧ развивается хроническая инфекция, серопозитивные лица являются не только активно инфицированными, но также и заразными.

Серологический тест для определения наличия антител к ВИЧ стал широкодоступным в 1985 г. Наиболее часто применяемым методом является связанный с ферментом иммуносорбентный анализ (ELISA), однако в настоящее время разрабатываются другие типы проверок на наличие антител, такие, как тесты, основанные на агглютинации частиц и «dot» ELISA. Тесты можно выполнить быстро и просто, они не нуждаются в сложном оборудовании.

Хотя вышеупомянутые тесты в высокой степени чувствительны, они могут давать и ложные результаты, а положительный результат нуждается в дальнейшем подтверждении с помощью дополнительного теста, такого, как иммуноблоттинг (вестерн-блот) или непрямая иммунофлуоресценция.

Также возможно непосредственное определение антигенов ВИЧ (вируса или вирусного белка) в сперме; промышленность выпускает необходимые наборы реактивов. Эти анализы были первоначально разработаны как попытка получить лабораторный показатель наличия инфекции в период «окна» между заражением и образованием антител, которое обычно продолжается от 4 до 16 нед. Анализы для выявления антигенов в настоящее время используются более широко для контроля за результатами противовирусного лечения больных СПИДом.

Программы скрининга на наличие инфекции ВИЧ (т. е. обследование всего населения, или отдельных групп населения с целью определения инфицированности или наличия заболевания) могут помочь:

• предупредить передачу вируса через кровь и продукты крови, сперму, ткани или органы для пересадки;
• получить эпидемиологическую информацию о распространенности и частоте заболеваемости ВИЧ.

Каждый раз, когда обсуждается программа скрининга, следует точно формулировать и решать все вопросы, отмеченные в заявлении ВОЗ (Приложение 4). Плохо разработанные и плохо осуществленные программы могут нанести ущерб общественному здоровью и привести к потере ресурсов. Удовлетворение потребностей общественного здравоохранения и соблюдение прав человека обеспечиваются наилучшим образом при тщательном рассмотрении целого ряда вопросов, связанных с технологией и материально-техническим снабжением, а также социальных, правовых и этических проблем до того, как будет принято решение о продолжении скрининговой программы.

Обязательному скринингу на ВИЧ отводится весьма ограниченная роль в программах профилактики и борьбы со СПИДом.

Рутинный скрининг доноров помогает предотвратить передачу ВИЧ с кровью, спермой или с другими клетками, тканями и органами. Частью такого скрининга являются согласие индивида, основанное на информации, и проведение консультаций, при которых должна быть обеспечена конфиденциальность.

Выявление серопозитивных лиц с помощью обследования позволяет определить эпидемиологический тип ВИЧ, что необходимо для оценки районов и групп населения, нуждающихся в особых программах просвещения или других профилактических службах. Эти обследования следует проводить с использованием методов, не угрожающих соблюдению прав человека. Их следует осуществлять во время консультации либо получив согласие от информированного индивида, соблюдая при этом конфиденциальность, либо анонимным, свободным образом (без регистрации других данных, позволяющих установить личность).

Добровольные проверки на СПИД могут стать частью медико-сани-тарной помощи при подозрении на заболевания, связанные с ВИЧ, а также могут быть осуществлены в комплексе с информированием, просвещением, консультированием и другими поддерживающими службами и призваны содействовать устойчивым изменениям поведения. При добровольных проверках на ВИЧ очень важны получение согласия от информированного индивида и возможность консультирования при условии сохранения конфиденциальности. Частью программ предупреждения СПИДа и борьбы с ним должны стать широкодоступные службы добровольных проверок на ВИЧ, причем следует облегчить доступ к таким службам.