HIV-nakkuse õigeaegne diagnoosimine muutub äärmiselt oluliseks meetmeks, kuna õigeaegne ravi alustamine võib suuresti määrata haiguse edasise arengu ja pikendada patsiendi eluiga. IN viimased aastad Selle kohutava haiguse tuvastamisel on tehtud märkimisväärseid edusamme: vanemad testimissüsteemid asendatakse arenenumatega, uurimismeetodid muutuvad kättesaadavamaks ja nende täpsus suureneb oluliselt.

Selles artiklis räägime kaasaegsetest HIV-nakkuse diagnoosimise meetoditest, mille tundmine on kasulik selle probleemi õigeaegseks raviks ja patsiendi normaalse elukvaliteedi säilitamiseks.

HIV diagnostika meetodid

Venemaal viiakse HIV-nakkuse diagnoosimiseks läbi standardprotseduur, mis hõlmab kahte taset:

• ELISA testisüsteem (sõelanalüüs);
• immunoblotanalüüs (IB).

Diagnoosimiseks võib kasutada ka muid meetodeid:

• kiirtestid.

ELISA testisüsteemid

Diagnoosimise esimeses etapis kasutatakse HIV-nakkuse tuvastamiseks skriiningtesti (ELISA), mis põhineb laborites loodud HIV-valkudel, mis püüavad kinni infektsioonile vastuseks organismis toodetud spetsiifilised antikehad. Pärast nende interaktsiooni katsesüsteemi reagentidega (ensüümidega) muutub indikaatori värvus. Järgmisena töödeldakse neid värvimuutusi spetsiaalse varustusega, mis määrab tehtud analüüsi tulemuse.

Sellised ELISA testid võivad anda tulemusi mõne nädala jooksul pärast HIV-nakkuse sissetoomist. See test ei määra viiruse olemasolu, vaid tuvastab selle vastaste antikehade tekke. Mõnikord algab HIV-vastaste antikehade tootmine inimkehas pärast 2-nädalast nakatumist, kuid enamikul inimestel toodetakse neid kauem. hilisemad kuupäevad, 3-6 nädala pärast.

Erineva tundlikkusega ELISA teste on neli põlvkonda. Viimastel aastatel on üha enam kasutatud kolmanda ja neljanda põlvkonna testimissüsteeme, mis põhinevad sünteetilistel peptiididel või rekombinantsetel valkudel ning on suurema spetsiifilisuse ja täpsusega. Neid saab kasutada HIV-nakkuse diagnoosimiseks, HIV levimuse jälgimiseks ja ohutuse tagamiseks annetatud vere testimisel. III ja IV põlvkonna ELISA testisüsteemide täpsus on 93-99% (riikides toodetud testid on tundlikumad Lääne-Euroopa – 99%).

ELISA testi tegemiseks võetakse patsiendi veenist 5 ml verd. vahel viimane kohtumine toit ja analüüs peaksid võtma vähemalt 8 tundi (reeglina tehakse seda hommikul tühja kõhuga). Selline test on soovitatav teha mitte varem kui 3 nädalat pärast kahtlustatavat nakatumist (näiteks pärast kaitsmata seksuaalvahekorda uue seksuaalpartneriga).

ELISA testi tulemused saadakse 2-10 päevaga:

• negatiivne tulemus: näitab HIV-nakkuse puudumist ja ei nõua spetsialisti poole pöördumist;
• valenegatiivne tulemus: võib täheldada varajased kuupäevad infektsioon (kuni 3 nädalat), AIDSi hilises staadiumis koos raske immuunsupressiooni ja ebaõige vere ettevalmistamisega;
• vale positiivne tulemus: võib täheldada teatud haiguste korral ja vere vale ettevalmistamise korral;
• positiivne tulemus: viitab HIV-nakkusele, nõuab IB läbiviimist ja patsiendi pöördumist AIDS-i keskuse spetsialisti poole.

Miks võib ELISA test anda valepositiivseid tulemusi?

Valepositiivsed HIV ELISA testi tulemused võivad ilmneda vale veretöötluse tõttu või patsientidel, kellel on järgmised seisundid ja haigused:

• hulgimüeloom;
• nakkushaigused, provotseeritud Epstein-Barri viiruse poolt;
• olek pärast ;
• autoimmuunhaigused;
• raseduse taustal;
• seisund pärast vaktsineerimist.

Ülalkirjeldatud põhjustel võib veres esineda mittespetsiifilisi ristreageerivaid antikehi, mille tootmist ei kutsunud esile HIV-nakkus.

Viimastel aastatel on valepositiivsete tulemuste sagedus oluliselt vähenenud tänu III ja IV põlvkonna testsüsteemide kasutamisele, mis sisaldavad tundlikumaid peptiid- ja rekombinantseid valke (need sünteesitakse in vitro geenitehnoloogia abil). Pärast selliste ELISA testide kasutuselevõttu vähenes valepositiivsete tulemuste sagedus oluliselt ja on umbes 0,02-0,5%.

Valepositiivne tulemus ei tähenda, et inimene on HIV-nakkusega. Sellistel juhtudel soovitab WHO teha veel ühe ELISA testi (tingimata IV põlvkonna).

Patsiendi veri saadetakse referent- või arbitraažilaborisse tähisega "repeat" ja testitakse IV põlvkonna ELISA testimissüsteemiga. Kui uue analüüsi tulemus on negatiivne, loetakse esimene tulemus ekslikuks (valepositiivseks) ja IS-i ei teostata. Kui teise testi käigus on tulemus positiivne või küsitav, peab patsient HIV-nakkuse kinnitamiseks või ümberlükkamiseks läbima IB 4-6 nädala pärast.

Immuunbloteerimine

HIV-nakkuse lõplikku diagnoosi saab teha alles pärast positiivse immunoblotanalüüsi (IB) tulemuse saamist. Selle läbiviimiseks kasutatakse nitrotselluloosi riba, millele kantakse viirusvalgud.

IB vereproovid võetakse veenist. Järgmisena läbib see spetsiaalse töötluse ja selle seerumis sisalduvad valgud eraldatakse spetsiaalses geelis vastavalt nende laengule ja molekulmassile (manipuleerimine toimub spetsiaalse varustuse abil elektrivälja mõjul). Vereseerumi geelile kantakse nitrotselluloosriba ja spetsiaalses kambris tehakse blotimine (“bloteerimine”). Riba töödeldakse ja kui kasutatud materjalid sisaldavad HIV-vastaseid antikehi, seostuvad need IB-l olevate antigeensete ribadega ja ilmuvad joontena.

IB loetakse positiivseks, kui:

• Ameerika CDC kriteeriumide järgi - ribal on kaks või kolm rida gp41, p24, gp120/gp160;
• Ameerika FDA kriteeriumide kohaselt on ribal kaks rida p24, p31 ja rida gp41 või gp120/gp160.

99,9% juhtudest viitab positiivne IB tulemus HIV-nakkusele.

Kui ridu pole, on IB negatiivne.

Ridade tuvastamisel gr160, gr120 ja gr41 on IB kahtlane. See tulemus võib ilmneda, kui:

• onkoloogilised haigused;
• Rasedus;
• sagedased vereülekanded.

Sellistel juhtudel on soovitatav uuringut korrata, kasutades teise ettevõtte komplekti. Kui pärast täiendavat IB-d jääb tulemus kahtlane, on vaatlus vajalik kuue kuu jooksul (IB viiakse läbi iga 3 kuu järel).

polümeraasi ahelreaktsioon

PCR-testiga saab tuvastada viiruse RNA. Selle tundlikkus on üsna kõrge ja see võimaldab tuvastada HIV-nakkuse 10 päeva jooksul pärast nakatumist. Mõnel juhul võib PCR anda valepositiivseid tulemusi, kuna selle kõrge tundlikkus võib reageerida ka teiste infektsioonide antikehadele.

See diagnostikameetod on kallis ja nõuab spetsiaalset varustust ja kõrgelt kvalifitseeritud spetsialiste. Need põhjused ei võimalda populatsiooni massilist testimist läbi viia.

PCR-i kasutatakse järgmistel juhtudel:

• HIV avastamiseks vastsündinutel, kes on sündinud HIV-nakkusega emadelt;
• HIV tuvastamiseks “aknaperioodil” või kahtlase IB korral;
• kontrollida HIV kontsentratsiooni veres;
• doonorivere uurimiseks.

PCR-test üksi ei pane HIV-i diagnoosi, vaid seda tehakse täiendava diagnostilise meetodina vastuoluliste olukordade lahendamiseks.

Ekspressmeetodid

HIV diagnostika üheks uuenduseks on kiirtestid, mille tulemusi saab hinnata 10-15 minuti jooksul. Kõige tõhusamad ja täpsemad tulemused saadakse kapillaaride voolu põhimõttel põhinevate immunokromatograafiliste testide abil. Need on spetsiaalsed ribad, millele kantakse verd või muid uuritavaid vedelikke (sülg, uriin). Kui HIV-vastased antikehad on olemas, ilmub 10-15 minuti pärast testile värviline kontrollriba - positiivne tulemus. Kui tulemus on negatiivne, kuvatakse ainult kontrollriba.

Nagu ELISA testide puhul, tuleb ka kiirtestide tulemusi kinnitada IB analüüsiga. Alles pärast seda saab määrata HIV-nakkuse diagnoosi.

Saadaval on koduseks kiirtestimiseks mõeldud komplektid. OraSure Technologies1 test (USA) on FDA heaks kiidetud, saadaval käsimüügis ja seda saab kasutada HIV tuvastamiseks. Pärast testi, kui tulemus on positiivne, soovitatakse patsiendil diagnoosi kinnitamiseks läbida uuring spetsialiseeritud keskuses.

Muud testid koduseks kasutamiseks ei ole FDA veel heaks kiitnud ja nende tulemused võivad olla väga küsitavad.

Hoolimata asjaolust, et kiirtestid on IV põlvkonna ELISA testidest madalama täpsusega, kasutatakse neid laialdaselt elanikkonna täiendavaks testimiseks.

HIV-nakkuse tuvastamiseks saate teste teha igas kliinikus, keskhaiglas või spetsialiseeritud AIDS-i keskuses. Venemaa territooriumil viiakse need läbi täiesti konfidentsiaalselt või anonüümselt. Iga patsient võib oodata meditsiinilist või psühholoogilist konsultatsiooni enne või pärast testi. HIV-testide eest peate maksma ainult kaubanduses raviasutused ning avalikes kliinikutes ja haiglates tehakse neid tasuta.

Lugege, kuidas saate HIV-iga nakatuda ja millised müüdid levivad nakatumisvõimaluste kohta.

Mängib otsustavat rolli HIV-nakkuse diagnoosimisel laboratoorne diagnostika, mis seisneb HIV-vastaste antikehade tuvastamises veres ELISA meetodil, millele järgneb positiivsete tulemuste kinnitamine IB meetodil. See HIV-nakkuse diagnoosimise meetod võimaldab tuvastada HIV-nakatunud isikuid 99% efektiivsusega.

Näidustused erinevate kasutamiseks laboriuuringud ja tulemuste tõlgendamise tunnused

Praegu kasutatakse HIV-nakkuse diagnoosimise sõeluuringu etapis ELISA meetodil põhinevaid kolmanda ja neljanda põlvkonna reaktiivide komplekte. Neljanda põlvkonna testide eripäraks on võime tuvastada samaaegselt hüpertensiooni (p24) ja koguantikehi, samas kui kolmanda põlvkonna testid võimaldavad määrata ainult antikehi. Võimaluse korral tuleks eelistada neljanda põlvkonna teste, kuna need on suurema diagnostilise tundlikkusega ja võime tuvastada isikutel nakatumist seroloogilise akna ajal.

Negatiivne tulemus HIV-i antikehade tuvastamisel ELISA abil ei viita alati nakkuse puudumisele. Tõsine probleem tähistavad juhtumeid, kui test viidi läbi seroloogilise akna ajal, st. esimestel nädalatel pärast nakatumist, kui piisaval hulgal HIV-vastaseid antikehi ei ole veel välja kujunenud. Mõne inimese puhul võib seroloogiline aken pikendada mitu kuud, nii et kui on tõendeid HIV-ga kokkupuute kohta, tehakse kordustest tavaliselt 2–3 kuu pärast. HIV-vastaste antikehade tuvastamisel ELISA abil saab valenegatiivseid tulemusi saada haiguse lõppstaadiumis, mida iseloomustab tõsine kahjustus immuunsussüsteem AT moodustumise protsessi põhjaliku katkemisega.

ELISA meetodil AT tuvastamise positiivne tulemus näitab HIV-nakkuse nakatumise tõenäosust, kuid mõnikord võib see tulemus olla valepositiivne, näiteks kui inimesel on raseduse ajal kasvajad, allergilised haigused, autoimmuunhaigused, olulised muutused biokeemilise vereanalüüsi parameetrites, hulk kroonilised haigused. Sellistel juhtudel on vaja täiendavaid uuringuid ekspertlaboris.

Kui ELISA-ga HIV-vastaste antikehade tuvastamisel saadakse positiivne tulemus, on vajalik selle kinnitamine. Kinnitamise esimeses etapis korratakse analüüsi samas katsesüsteemis kahes kaevus – see välistab tehnilised vead. Kui tulemus kinnitatakse, korratakse AT määramist ELISA abil patsiendi seerumis, kasutades kahte võrdlusreaktiivide komplekti. Kui vähemalt ühes neist uuringutest saadakse positiivne tulemus, viiakse läbi kolmas kinnitusetapp: IB-uuring, mis võimaldab tuvastada üksikute HIV-antigeenivalkude vastaseid antikehi.

Infoturbe meetodil saadud tulemusi tõlgendatakse positiivsete, kaheldavate ja negatiivsetena. Tulemused loetakse negatiivseks, kui testitav seerum ei sisalda ühegi HIV-antigeeni vastaseid antikehi või esineb nõrk reaktsioon p17 valguga. Kõige mõjuvam põhjus positiivne reaktsioon on HIV ümbrisvalkude (glükoproteiinid gp41, gp120, gp160) vastaste antikehade tuvastamine. Tulemus loetakse positiivseks, kui tuvastatakse antikehad mis tahes kahe HIV glükoproteiini vastu. Kui reaktsioon toimub ainult ühe ümbrisvalguga, kombinatsioonis teiste valkudega või ilma reaktsioonita, loetakse tulemus kaheldavaks, sel juhul on soovitatav teha p24 antigeeni või HIV DNA/RNA tuvastamiseks testid. Kui tuvastatakse p24 antigeen või HIV DNA/RNA, tehakse IB-ga kordusuuring 2 nädalat pärast esimese ebamäärase tulemuse saamist ja seejärel iga 2 nädala järel kuni kinnitava testi positiivse tulemuseni. Kui 6 kuud pärast esimest läbivaatust saadakse uuesti ebamäärased tulemused ning patsiendil ei ole tuvastatud nakkuse riskitegureid ja kliinilised sümptomid HIV-nakkusega, loetakse tulemus valepositiivseks.

Sageli ilmuvad 1–3–6 kuu möödumisel küsitava tulemuse saamisest vereseerumis üksteise järel kõigi HIV Ag-de antikehad. Sel juhul on kahtlane tulemus tõendusmaterjal esialgne etapp HIV-nakkused. Mõnel juhul täheldatakse küsitavaid IB tulemusi nakatumata isikutel, kelle kehad sisaldavad HIV-vastaste tõeliste antikehadega sarnaseid antikehi.

Üks HIV-nakkuse kaudseid tunnuseid on CD4+ T-abistajarakkude selektiivne vähenemine, kuna HIV-l on tropism CD4 raku retseptori suhtes. Kuid need muutused võivad HIV-nakkuse teatud staadiumides puududa, olla erinevatel patsientidel individuaalsed ja esineda ka muude haiguste korral. Seega ületab haiguse varjatud staadiumis täiskasvanud patsientidel CD4+ lümfotsüütide arv tavaliselt 0,5. 109/l, mis vastab tervete inimeste väärtustele.

Sõeluuringud – tuvastamata haiguste esinemissageduse tuvastamine kiirtestide abil. Testimise ja skriinimise massipraktikas kasutatakse kõige sagedamini ensüümseotud immunosorbentanalüüsi meetodeid, mis võivad anda nii valepositiivseid kui ka valenegatiivseid tulemusi. Need testid töötati välja doonorivere uurimise eesmärgil ja on seetõttu kõrge tundlikkusega, nii et isegi võimalik viga nende testimisel annab positiivse tulemuse. Sel juhul tuleb veri hävitada ja doonor ise läbib kontrolltesti. Valenegatiivsed tulemused sõltuvad asjaolust, et inkubatsiooniperiood HIV-nakkuse korral on 1-3 kuud. Sel perioodil on inimene viirusekandja, mida HIV-antikehade test ei tuvasta.

Kõigile tuleks anda võimalus end HIV-antikehade suhtes testida. Testimine võib olla vabatahtlik või kohustuslik. Vabatahtliku anonüümse testimise käigus registreeritakse patsient numbri all ning dokumenti ei kanta ei patsiendi aadressi ega perekonnanime. Konfidentsiaalse testimise korral kajastub teave patsiendi isiku kohta tema haiguslugudes.HIV-testimisega peaks kaasnema patsiendi nõustamine nii enne kui ka pärast testimist. Patsiendi adekvaatsest informeerimisest saab parim psühhoteraapia.Lõplikult teavitatakse patsiente testi tulemustest alles pärast positiivsete testitulemuste kinnitamist. Seda tehakse selleks, et vältida selliseid traagilisi juhtumeid, nagu 1998. aastal Riias juhtus: paar neist ühe positiivsetest testitulemustest teada saades sooritas enesetapu; Surmajärgsed uuringud ei näidanud HIV-nakkuse tunnuseid. Kohustusliku HIV-testimise ja sõeluuringu küsimus on väga vastuoluline. USA-s kehtestati alates 1985. aastast kohustuslik testimine sõjaväes. Mõnes osariigis on AIDS-i testimine kohustuslik enne abiellumist ja 1997. aastal hakati New Yorgi osariigis nõudma kõigi vastsündinute HIV-testimist.

Paljud väliseksperdid leiavad, et kohustuslik HIV-testimise praktika mitte ainult ei riku inimõigusi, vaid osutub ka epideemia leviku tõkestamiseks ebatõhusaks ning seetõttu tuleks selle rakendamist piirata.

Meie riigis kehtestati AIDS-i haiguste kohustuslik registreerimine 1985. aastal, alates hetkest, mil tuvastati esimene haigusjuht. 1987. aastal edastas üleliiduline raadio epidemioloogide eestvõttel teate Moskvas anonüümse AIDSi ekspertiisibüroo avamisest. Paar päeva hiljem alustas see kontor tööd, võttes vastu kuni tuhat inimest kuus. Selle tulemusena 1987.–1992. HIV-testi on tehtud üle 85 miljoni.

Venemaal kasutatakse laialdaselt epidemioloogilise uurimismeetodit. Epidemioloogiline uurimine on igal nakkusjuhul nakkusallika väljaselgitamine, võimalusel kogu nakkuse edasikandumise “ahela” taastamine ja samal ajal meetmed nakkuse leviku tõkestamiseks. Vastu võetud 1995. aastal föderaalseadus Inimese immuunpuudulikkuse viiruse poolt põhjustatud haiguse leviku tõkestamiseks Vene Föderatsioonis tühistati nõue teha "partneritele" kohustuslik AIDS-i testimine. Samuti on kaotatud HIV-i nakatunute kohustuslik ennetav jälgimine tervishoiuasutustes. Seaduse järgi peavad AIDSi suhtes kohustuslikus korras testima ainult vere, bioloogiliste vedelike, elundite ja kudede doonoreid ning teatud elukutsete esindajaid.

HIV-nakkuse diagnoosi saab teha laboris, tuvastades viiruse spetsiifilised antikehad. Paljude teistega viirushaigused antikehade olemasolu viitab varasemale infektsioonile. Kuna aga HIV-nakkus areneb krooniline infektsioon, seropositiivsed isikud ei ole mitte ainult aktiivselt nakatunud, vaid ka nakkusohtlikud.

Seroloogiline test HIV-antikehade olemasolu määramiseks sai laialdaselt kättesaadavaks aastal 1985. Kõige sagedamini kasutatav meetod on ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA), kuid väljatöötamisel on ka teist tüüpi antikehade testid, näiteks testid, mis põhinevad osakeste aglutinatsioonil ja "punkt" ELISA. Testid saab teha kiiresti ja lihtsalt ning ei vaja keerulisi seadmeid.

Kuigi ülalnimetatud testid on väga tundlikud, võivad need anda ka valetulemusi ja positiivset tulemust tuleb täiendavalt kinnitada, kasutades lisatesti, nagu immunoblotanalüüs (Western blot) või kaudne immunofluorestsents.

Samuti on spermas võimalik vahetult tuvastada HIV-antigeene (viirus või viirusvalk); tööstus toodab vajalikke reaktiivide komplekte. Need testid töötati algselt välja katsena anda laboratoorsed näitajad infektsiooni esinemise kohta infektsiooni ja antikehade tootmise vahelisel ajavahemikul, mis kestab tavaliselt 4 kuni 16 nädalat. Antigeenide tuvastamise analüüse kasutatakse nüüd laialdasemalt AIDS-i patsientide viirusevastase ravi tulemuste jälgimiseks.

HIV-nakkuse sõeluuringuprogrammid (st kogu elanikkonna või konkreetsete elanikkonnarühmade testimine, et teha kindlaks, kas nad on nakatunud või põevad haigust) võivad aidata:

• vältida viiruse edasikandumist vere ja veretoodete, sperma, kudede või elundite siirdamise kaudu;
• saada epidemioloogilist teavet HIV levimuse ja esinemissageduse kohta.

Alati, kui sõeluuringuprogrammi arutatakse, tuleks kõik WHO avalduses (lisa 4) määratletud probleemid selgelt välja tuua ja käsitleda. Halvasti kavandatud ja halvasti rakendatud programmid võivad kahjustada rahvatervist ja raisata ressursse. Rahvatervise vajaduste rahuldamise ja inimõiguste austamise tagab kõige paremini mitmete tehnoloogiliste, logistiliste, sotsiaalsete, juriidiliste ja eetiliste küsimuste hoolikas kaalumine enne sõeluuringuprogrammiga jätkamise otsuse tegemist.

Kohustuslikul HIV-sõeluuringul on AIDSi ennetus- ja tõrjeprogrammides väga piiratud roll.

Rutiinne doonori sõeluuring aitab vältida HIV-nakkust vere, sperma või muude rakkude, kudede ja elundite kaudu. Osa sellisest läbivaatusest hõlmab isiku teadlikku nõusolekut ja konsultatsioone, mille käigus tuleb tagada konfidentsiaalsus.

Seropositiivsete isikute tuvastamine sõeluuringu abil võib määrata HIV epidemioloogilise tüübi, mis on vajalik eriharidusprogramme või muid ennetusteenuseid vajavate piirkondade ja populatsioonide hindamiseks. Need uuringud tuleks läbi viia meetoditega, mis ei kahjusta inimõigusi. Need tuleks läbi viia konsultatsiooni käigus, kas teadliku isiku nõusolekul, säilitades konfidentsiaalsuse, või anonüümselt ja vabal viisil (muu isikut tuvastavat teavet salvestamata).

Vabatahtlik AIDSi testimine võib olla osa tervishoiust HIV-ga seotud haiguste kahtluse korral ning seda saab rakendada koos teavitamise, hariduse, nõustamise ja muude tugiteenustega, et edendada jätkusuutlikku käitumise muutust. Vabatahtliku HIV-testimise puhul on väga olulised teadliku isiku nõusoleku saamine ja nõustamise võimalus, säilitades samas konfidentsiaalsuse. Vabatahtlikud HIV-testimise teenused peaksid olema AIDSi ennetus- ja tõrjeprogrammide osana laialdaselt kättesaadavad ning juurdepääs sellistele teenustele tuleks lihtsustada.